# 污水流行病学
对市政污水进行聚合性、非侵入式的分子监测，用于检测病原体、抗生素耐药性与精神活性物质——一项建立在病毒浓缩、微滴数字PCR与宏基因组测序之上的公共卫生预警情报服务。
Source: https://cn.bioecon.ru/technology/wastewater-based-epidemiology/
Updated: 2026-08-18
## 概述与价值链
标记：[EC: WS/T 10042-2025 / 污水监测与公共卫生情报 | OECD: environmental-biotech | Regulator: FDA (美国), EMA (欧盟), NMPA (中国)]
污水流行病学（Wastewater-Based Epidemiology, WBE）是一种非侵入式的公共卫生情报服务，通过对取自污水管网的代表性混合样本进行分子分析，对整个城市及封闭社区（高校、监狱、养老院、机场）中循环的病毒性、细菌性病原体、抗生素耐药性（AMR）标志物以及精神活性物质进行筛查。每位居民每天通过粪便或尿液排放病毒颗粒，都会贡献到信号中，因此污水处理厂的一份24小时混合样本即可概括整个汇水区的感染负担——比其表现为住院**提前7至14天**发现病毒载量上升，且单病原体成本比个体临床检测低数个数量级。Biobot Analytics在采样后**3–5天**内即返回**50余项**健康信号的定量病原体结果；由Verily支持的WastewaterSCAN网络覆盖**40个州的147座污水处理厂及超过3700万人口**；Bio-Rad QX600微滴发生器将每份反应分割为**约20,000**个单分散性纳米液滴，对SARS-CoV-2的流程检出限为**每升2,160–2,680拷贝**；而阿姆斯特丹斯希普霍尔机场的长期监测在两年半的疫情期间定量检出SARS-CoV-2的阳性率达**98.6%（273/277）**。
污水流行病学的关键方向包括：
1. **病毒颗粒浓缩：** 市政污水极为稀释且富含抑制剂；负电膜过滤、PEG沉淀与离心超滤（Amicon 100 kDa）可选择性地将脆弱的包膜RNA病毒从数百毫升浓缩至1–2毫升，常规浓缩倍数可达**100–133倍**。
2. **微滴数字PCR（ddPCR）绝对定量：** 将洗脱液分割为约20,000个单分散性纳米液滴，使每滴成为独立的泊松反应器，无需校准曲线即可给出绝对基因组拷贝数，并能耐受会使RT-qPCR失效的腐殖酸与重金属盐抑制剂。
3. **新一代宏基因组测序（mNGS）：** 深度鸟枪法与杂交捕获测序（Illumina NovaSeq）可刻画所有循环毒株、解析罕见与新出现的亚谱系，并绘制城市的耐药组——杂交捕获可将病毒读段比例提升至**19%以上**，并能标记靶向面板遗漏的新病原。
4. **PMMoV归一化与预测分析：** 用粪便标志物——辣椒轻微斑驳病毒（PMMoV）——去除病原体原始浓度的雨水稀释影响，再接入GIS仪表板，其AI模型可比医生报告提前1–2周预测临床暴发曲线。
### 行业价值链
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[WWTP的24小时混合自动采样器] ──> [超滤 / 浓缩] ──> [RNA/DNA提取]
│
(ddPCR / 深度NGS)
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[市政应对响应] <─── [预测性Biobot / WWSCAN仪表板] <── [PMMoV归一化]
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### 价值链层级
| 层级 | 描述 | 关键输入/输出 |
|:---|:---|:---|
| **污水采样** | 在WWTP进水口安装的按流量比例的24小时混合自动采样器（Teledyne ISCO），每15分钟采集一次至+4 °C冷藏仓。 | **输入：** 原始市政进水、冷藏混合采样器。
**输出：** 具代表性的24小时混合污水样本（1.0–1.5升）。 |
| **浓缩** | 离心澄清后，对上清液进行负电膜过滤或离心超滤（Amicon Ultra-15，截留分子量100 kDa）。 | **输入：** 原始污水样本、缓冲液、PEG 8000、超滤柱。
**输出：** 病毒与细菌颗粒浓缩液（1–2毫升，富集100–133倍）。 |
| **核酸提取** | 在磁珠自动化平台（KingFisher Flex / MagMax）上，用胍裂解缓冲液与Phi6过程对照去除PCR抑制剂。 | **输入：** 病毒浓缩液、裂解缓冲液、磁性纳米珠、Phi6对照。
**输出：** 无抑制剂的纯化总RNA/DNA（约100微升）。 |
| **ddPCR与NGS分析** | 多重TaqMan ddPCR（Bio-Rad QX600）用于病原体绝对计数，深度宏基因组测序（Illumina NovaSeq）用于变异与耐药组。 | **输入：** 纯化核酸、ddPCR试剂、NovaSeq流动槽。
**输出：** 每毫升基因组拷贝数及FASTQ突变/变异谱。 |
| **PMMoV归一化** | 将病原体原始浓度除以粪便标志物PMMoV，以校正雨水稀释与人均粪便负荷。 | **输入：** 病原体原始浓度、测得的PMMoV浓度。
**输出：** 人均归一化病毒载量（每克粪便拷贝数）。 |
| **预测仪表板** | 云端GIS平台（Biobot Portal、data.wastewaterscan.org）将归一化数据与临床史整合，并向卫生部门推送预警。 | **输入：** 归一化数据、临床基线、GIS坐标。
**输出：** 交互式市政仪表板与7–14天暴发预报。 |
该行业的跨领域技术：
- **数字PCR（ddPCR/dPCR）：** Bio-Rad QX600（每反应约20,000滴）与QIAGEN QIAcuity平台在污水监测上跨平台等效，支撑多实验室网络。
- **杂交捕获与鸟枪法宏基因组：** Twist Comprehensive Viral Research Panel + Illumina NovaSeq将病毒读段比例提升至19%以上，每个汇水区可检出超过1,300个病毒种。
- **沉淀固体法：** WastewaterSCAN对污水固体（污泥）的分析将分析灵敏度较液体进水提高约10倍，并稳定点位内方差。
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## 美国
美国运行着最发达的商业WBE生态系统，由CDC国家污水监测系统（NWSS）协同商业数据初创企业与学术联盟统筹；如今白宫ONDCP已将污水数据用于全国精神活性物质情报。
### Biobot商业领导力、CDC NWSS、Verily WastewaterSCAN、NIH RADx管线
- **Biobot Analytics（马萨诸塞州剑桥）：** 由MIT校友创立的初创企业（成立于2017年，15轮融资累计9,150万美元，年营收约2,000万美元），运营全国Biobot Portal平台；2026年1月获白宫ONDCP合同，在2020–2024年NIDA SBIR项目基础上，针对20余种化学靶标提供全国物质使用情报。
- **CDC国家污水监测系统（NWSS）：** 该联邦项目将商业运营商与学术实验室数据汇聚为统一的预警系统；CDC NWSS同时认可Bio-Rad与QIAGEN数字PCR平台用于多实验室监测。
- **Verily WastewaterSCAN（Stanford/Emory）：** Alphabet旗下的生命科学子公司与斯坦福大学、埃默里大学合作，运营覆盖40个州147座污水处理厂、逾3,700万人的沉淀固体网络，2026年2月在约94%的样本中检出SARS-CoV-2 N基因RNA（中位数31,869拷贝/克）。
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## 中国
中国正在China CDC的集中规划下建设工业规模的污水流行病学体系，并将其编纂入新的国家标准WS/T 10042-2025，在主要特大城市与工业园区部署。
### China CDC全国污水监测、WS/T 10042-2025标准、清华方法、工业园区AMR监测
- **China CDC全国网络：** 中国疾控中心环境所于2025年11月在珠海召开15城市多病原污水监测研讨会，与会50名专家，并在陕西（西安、宝鸡、榆林、安康）开展省级推广的现场验证，针对霍乱、伤寒及呼吸道病原体。
- **国家标准WS/T 10042-2025：** 由中国疾控中心、清华大学与香港大学共同起草的《污水中新型冠状病毒监测技术规范》于2026年6月1日生效，在全国范围内统一采样点、病毒富集、核酸检测与数据上报。
- **工业园区与人畜共患病监测：** 省级CDC将WBE延伸至家禽与工业园区以追踪抗生素耐药性并防范人畜共患病暴发，清华大学环境生物技术团队则研发高效纳米吸附剂与抗污染膜材料用于流路中的病毒捕获。
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## 欧盟
欧盟是最先以法律强制要求大城市开展污水监测的司法管辖区，在欧洲联合研究中心（JRC）与荷兰KWR Water Research Institute的引领下建立起泛欧预警网络。
### 欧盟JRC监测强制令、KWR Water Research、SCORE联盟、Horizon Europe WBE项目
- **KWR Water Research Institute（荷兰）：** 全球WBE研发的先驱机构，率先在阿姆斯特丹斯希普霍尔机场污水中检出SARS-CoV-2；其长期研究在2020年2月至2022年9月期间对98.6%（273/277）的样本完成了病毒定量，并在91.0%（161/177）的测序样本中解析出变异株。
- **JRC立法强制令：** 依据欧盟指令，人口超过10万的每个城市均须每周对市政污水进行病原体与AMR标志物的基因组监测，并由JRC协调汇入统一的欧洲数据库。
- **SCORE联盟与机场监测：** Sewage Analysis CORe group Europe在全欧盟范围内统一违禁药物与药品消费分析，而德国（Robert Koch研究所 / 达姆施塔特工大）与荷兰团队则将该模式拓展至飞机与机场污水，作为旅行者监测的入口。
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## 领先企业与研究机构
| 公司 / 机构 | 国家 | 关键产品 / 平台 | 技术特点 | 2026年状态 |
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| **Biobot Analytics** | 🇺🇸 美国 | 全国WBE平台 *Biobot Portal* | 50余项病原与物质信号；3–5天出结果；ONDCP全国合同（2026年1月） | commercial |
| **Verily (Alphabet)** | 🇺🇸 美国 | 沉淀固体网络 *WastewaterSCAN* | 147座WWTP / 40个州 / >3,700万人；数字RT-PCR + 杂交捕获宏基因组 | commercial |
| **Bio-Rad** | 🇺🇸 美国 | *QX600 Droplet Digital PCR* 系统 | 每反应约20,000滴；检出限2,160–2,680拷贝/升；6通道多重；与QIAGEN跨平台 | commercial |
| **KWR Water Research** | 🇳🇱 荷兰 | 脊髓灰质炎 / AMR / SARS-CoV-2监测流程 | 斯希普霍尔机场98.6%检出；超滤与PMMoV归一化方法 | operating |
| **China CDC** | 🇨🇳 中国 | 全国市政污水多病原监测 | WS/T 10042-2025标准（2026年6月1日生效）；15城市网络；多点触发预警 | operating |
| **NEERI CSIR** | 🇮🇳 印度 | 全国WBE网络 + AI预测模型 | WHO CoViNet参比实验室；6大都会网络；dPCR + WGS，JN.1较临床提前约1周 | operating |
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## 技术栈与创新
WBE技术栈将低技术的采样物流与常规公共卫生应用中最为敏感的一些分子诊断和计算流行病学融合在一起。
1. **负电膜过滤与PEG沉淀：**
- 在弱酸性pH（3.5–5.5）下，病毒衣壳带净正电荷，并通过静电吸附在带有负官能团的纤维素酯膜上；随后用弱碱性（pH 9.0）洗脱缓冲液将浓缩后的病毒释放至1–2毫升。
- 在+4 °C下孵育的8% PEG 8000与0.3 M NaCl可沉淀病毒与蛋白质颗粒，经高速离心回收，提供100–133倍的浓缩倍数，将病原体从100–100,000拷贝/升的原始范围提升至检测窗口。
2. **微滴数字PCR（ddPCR）：**
- Bio-Rad QX600将每份20微升反应分割为约20,000个单分散性纳米液滴；终点PCR后，六通道光学读取器以每秒1,000滴的速度对液滴分类，泊松统计将阳性/阴性液滴之比换算为每微升的绝对拷贝数（95%置信区间），规避校准曲线与抑制剂的干扰。
- 2026年的一项头对头研究表明，Bio-Rad ddPCR与QIAGEN QIAcuity dPCR在污水定量上等价（均值差异≤0.12 log拷贝/升，R² >0.93），验证了多平台监测网络；Bio-Rad处理速度快32%（96孔板305对435分钟）。
3. **PMMoV归一化与预测分析：**
- 辣椒轻微斑驳病毒是一种随辣椒与辣酱摄入、以极为稳定的浓度随人类粪便排出的植物RNA病毒，是理想的粪便强度标志物：将病原体原始拷贝数除以匹配的PMMoV读数即可抵消雨水稀释。
- Biobot与WastewaterSCAN的云端GIS门户随后将归一化载量与临床基线及地理信息融合，给出7–14天的暴发预报；印度古吉拉特邦的WBE项目（2,130份样本）在污水与临床COVID-19之间达到皮尔逊相关系数r = 0.898，并比临床分离提前约一周捕获到JN.1谱系。
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## 价值链与生产流程
### 市政呼吸道病毒（SARS-CoV-2、甲/乙型流感）污水监测工业流程：在10座WWTP每周采样、超滤、在QX600上进行ddPCR绝对定量，并集成至市政Biobot预警门户（cGMP / cGDP / ISO 17025）
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│ 1. WWTP的24小时混合 │ ───> │ 2. 超滤与浓缩 │
│ 自动采样 │ │ │
└───────────────────────────┘ └───────────────────────────┘
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│ 4. 微滴生成与 │ <─── │ 3. 磁珠自动化RNA提取 │
│ ddPCR扩增 │ │ （MagMax） │
└───────────────────────────┘ └───────────────────────────┘
│
▼
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│ 5. QX600读取器上 │ ───> │ 6. PMMoV归一化与 │
│ 绝对拷贝计数 │ │ AI门户导出 │
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#### 阶段1：WWTP的24小时混合自动采样
安装在10座关键处理厂进水口的按流量比例的Teledyne ISCO自动采样器，每15分钟抽取50毫升原始进水，编制成1.5升的24小时混合样本，保存于+4 °C环境；快递员在采样完成后4小时内将冷藏样本送达分析实验室。
#### 阶段2：超滤与浓缩
将200毫升等分试样在4,000 × g下离心20分钟以沉降粗固体，上清液通过0.22微米聚醚砜真空滤器，滤液加载至Amicon Ultra-15 100 kDa超滤柱，在3,000 × g下离心30分钟，将病毒颗粒浓缩133倍至1.5毫升截留液。
#### 阶段3：磁珠自动化RNA提取
将1.0毫升病毒浓缩液转移至KingFisher Flex深孔板；MagMax裂解缓冲液（异硫氰酸胍）破坏衣壳并变性抑制剂，Phi6噬菌体过程对照评估回收效率，MagMax磁性纳米珠完成结合、洗涤并将纯化RNA洗脱至100微升TE缓冲液。
#### 阶段4：微滴生成与ddPCR扩增
将10微升RNA与One-Step RT-ddPCR试剂及针对SARS-CoV-2 N基因、甲型流感M基因、乙型流感HA基因和PMMoV标志物、由FAM/HEX/Cy5.5标记的多重TaqMan面板混合；QX600微滴发生器将20微升混合液分割为20,000个纳米液滴，随后进行40轮RT-PCR热循环。
#### 阶段5：QX600读取器上的绝对拷贝计数
PCR后的孔板加载至QX600微滴读取器，使液滴逐个以每秒1,000滴的速度穿过激光，覆盖六个光谱通道；QuantaSoft软件对液滴聚类，依据阳性与阴性液滴之比与泊松统计给出每微升洗脱液的绝对拷贝数及95%置信区间。
#### 阶段6：PMMoV归一化与AI门户导出
将绝对浓度除以匹配的PMMoV读数以抵消稀释，随后推送至市政Biobot Portal；AI模型将归一化载量与地理信息及临床史融合，给出7–14天的暴发预报，并自动向卫生部门告警，以便在受威胁区域部署床位并开展定向流动接种。